當前位置:首頁 » 觀西班牙 » 西班牙瓊脂糖多少g每瓶

西班牙瓊脂糖多少g每瓶

發布時間: 2022-06-20 06:10:46

㈠ 瓊脂糖一斤糖放多少克

瓊脂糖各濃度對應的片段大小
一般都會選擇1%瓊脂糖凝膠,90-120V電壓都沒有問題,如果要分離片段的話,片段相差不大建議調低電壓,增加瓊脂糖凝膠濃度,跑膠時盡量讓溴酚藍跑的越低越好,只要不把想要的片段跑出去就好.本人嘗試過2%瓊脂糖凝膠,40V,跑了近三個小時啊,分開了相差約50bp的兩個片段.
目的產物大小80BP的片段,你可以用2.0%的瓊脂糖凝膠進行電泳,瓊脂糖以及TAE的量的多少,首先與你跑得樣品的個數有關,因為你樣品的個數決定了你膠槽的體積,膠槽的體積決定了你的TAE的量,決定了瓊脂糖的量,比如說你膠槽的體積是20ml,那麼你要配2.0%的膠,就需要20ml的TAE和0.4g的瓊脂糖.

㈡ 瓊脂糖甲醛變性凝膠電泳

5月25日 09:54 瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖是從瓊脂中提純出來的,主要是由D-半乳糖和3,6脫水L-半乳糖連接而成的一種線性多糖。瓊脂糖凝膠的製作是將乾的瓊脂糖懸浮於緩沖液中,通常使用的濃度是1%-3%,加熱煮沸至溶液變為澄清,注入模板後室溫下冷卻凝聚即成瓊脂糖凝膠。瓊脂糖之間以分子內和分子間氫鍵形成較為穩定的交聯結構,這種交聯的結構使瓊脂糖凝膠有較好的抗對流性質。瓊脂糖凝膠的孔徑可以通過瓊脂糖的最初濃度來控制,低濃度的瓊脂糖形成較大的孔徑,而高濃度的瓊脂糖形成較小的孔徑。盡管瓊脂糖本身沒有電荷,但一些糖基可能會被羧基、甲氧基特別是硫酸根不同程度的取代,使得瓊脂糖凝膠表面帶有一定的電荷,引起電泳過程中發生電滲以及樣品和凝膠間的靜電相互作用,影響分離效果。市售的瓊脂糖有不同的提純等級,主要以硫酸根的含量為指標,硫酸根的含量越少,提純等級越高。
瓊脂糖凝膠可以用於蛋白質和核酸的電泳支持介質,尤其適合於核酸的提純、分析。如濃度為1%的瓊脂糖凝膠的孔徑對於蛋白質來說是比較大的,對蛋白質的阻礙作用較小,這時蛋白質分子大小對電泳遷移率的影響相對較小,所以適用於一些忽略蛋白質大小而只根據蛋白質天然電荷來進行分離的電泳技術,如免疫電泳、平板等電聚焦電泳等。瓊脂糖也適合於DNA、RNA分子的分離、分析,由於DNA、RNA分子通常較大,所以在分離過程中會存在一定的摩擦阻礙作用,這時分子的大小會對電泳遷移率產生明顯影響。例如對於雙鏈DNA,電泳遷移率的大小主要與DNA分子大小有關,而與鹼基排列及組成無關。另外,一些低熔點的瓊脂糖(62 ~ 65 °C)可以在65 °C時熔化,因此其中的樣品如DNA可以重新溶解到溶液中而回收。
由於瓊脂糖凝膠的彈性較差,難以從小管中取出,所以一般瓊脂糖凝膠不適合於管狀電泳,管狀電泳通常採用聚丙烯醯胺凝膠。瓊脂糖凝膠通常是形成水平式板狀凝膠,用於等電聚焦、免疫電泳等蛋白質電泳,以及DNA、RNA的分析。垂直式電泳應用得相對較少。
簡單介紹一個關於瓊脂糖凝膠電泳的實驗
CK同工酶的測定
標本採集、處理和貯存
CK同工酶檢測血清和血漿均可。在4℃可保存數天,-15℃可保存2周,若用血漿宜用EGTA,而不用EDTA抗凝。冷凍血漿測定時,應在30℃以下融化,需反復冰融者應加還原劑——巰基乙醇以穩定酶活性,速凍及貯存於-20℃或-70℃,在有β-巰基乙醇和EGTA存在時,MM和MB可穩定數年,而BB則僅穩定半年。由於CK同工酶半衰期短,故酶活性的高低受標本採集時間的影響較大。
瓊脂糖凝膠電泳法
1.原理
CK分子是由M和B兩種亞單位組成的二聚體,在電泳條件下,CK-BB遷移最快,CK-MB居中,CK-MM最慢。電泳後進行酶促反應顯色,觀察結果。顯色原理是:CK催化磷酸肌酸(CrP)及ADP,產生肌酸(Cr)及ATP,在偶聯的HK催化下葡萄糖被ATP磷酸化,形成G-6-P;在偶聯的G-6-PD催化下G-6-P被NADP+氧化,形成6-P-G,同時NADP+還原為NADPH。在365nm觀察NADPH的熒光或用熒光光密度計掃描定量。也可用四氮唑鹽顯色法,即利用酚嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)將NADPH的氫傳遞給氯化碘代硝基四唑(INT),使其還原成紫紅色的甲鐟,顯示CK同工酶區帶。
2.試劑
① 50mmol/L Tris-巴比妥緩沖液(pH8.0):稱取巴比妥6.716g,Tris 1.905g,溶於蒸餾水中並稀釋到1L,電泳用。
② 30mmol/L Tris-巴比妥緩沖液(pH8.6):稱取巴比妥1.21g,Tris 1.15g,以蒸餾水溶解並稀釋到500mL。
③ 5g/L瓊脂糖[內含14g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)]:稱取0.5g瓊脂糖,1.4gPVP,加試劑「②」100mL隔水煮沸溶解,分裝後4℃保存。
④ 400mmol/L Bis-Tris緩沖液(內含20mmol/L醋酸鎂、4mmol/L EDTA),pH7.0:稱取Bis-Tris 8.36g,EDTA Na2•2H2O 0.149g,加蒸餾水95ml溶解,用lmol/L醋酸調至pH7.0後,稱取醋酸鎂(含4分子水)0.429g,加入,用蒸餾水稀釋到100mL。4'C保存可用2個月,-20℃保存可用6個月。
⑤ 輔酶溶液(ADP 4mmol/L,AMP10mmol/L,NADP+4mmol/L,葡萄糖40mmol/L):稱取ADP 17.1mg,AMP36.5mg,NADP+29.7mg,葡萄糖72.1mg,加試劑「④」9mL平衡至25℃後,用lmol/L醋酸調pH至6.4(約用lml),在4℃保存可用半個月。
⑥ 底物顯色液甲(按兩張載玻片計):用前於甲管中加試劑「⑤」1.5mL,己糖激酶10.5 U,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶6 U。混合後置37℃水浴5min,加入PMS 0.02mg(2g/LPMS 0.01m1)。PMS須避光。在加PMS前的5min內配好底物顯色液乙,加PMS後,立即與乙液混合並覆蓋於電泳凝膠板上。
⑦ 底物顯色液乙:先配製下列試劑;
A. 450mmol幾磷酸肌酸:存4℃可用3個月。
B. 5g/L氯化碘代硝基四唑:置棕色瓶貯存,4℃可用3個月。
C. 12.5g/L瓊脂糖(含62.5mmol/L氯化鈉及35g/L聚乙烯吡咯烷酮):稱取1.25g瓊脂糖,加入100mL蒸餾水,隔水煮沸溶解後,再加入氯化鈉262.5mg及聚乙烯毗咯烷酮3.5g,溶解後分裝,置4℃保存。
用前於乙管中加入「A」液0.2mL,「B」0.2mL,置37℃水浴2min後,加入N-乙醯半胱氨酸(NAC)20mg,或還原型谷胱甘肽10mg。用預溫至37℃的滴管吸人,隔水煮沸融化後,溫度降至37~43℃(在37~43℃的水浴箱中平衡)的「C」液1.2mL,滴管吹吸混合,使NAC溶解。
⑧ 混合底物顯色液:當乙液配成後,立即吸甲液入乙液中,混合後立即使用。在水浴箱中操作,防止瓊脂糖凝固。必要時用0.2mL蒸餾水代磷酸肌酸溶液制備對照顯色液。如作熒光法,用不含PMS及INT的甲、乙液,用蒸餾水代INT溶液。
3.操作
(1)隔水煮沸溶解試劑「③」,取1.5mL鋪於1~1.2mm厚的載玻片上。於近陰極端並行挖兩個槽,作兩份標本,或作標本與控制物。
(2)加樣5μL,80V電泳50min。
(3)合理安排配製混合底物顯色液的時間,使配製完成時電泳結束。
(4)將電泳凝膠板置塗以黑漆的鋁盒中,吸底物顯色液1.5mL鋪於凝膠板上,加蓋,待凝後置37 ℃水浴1小時。
(5)置固定液(乙醇:醋酸:水=150:10:40)中2~4小時,轉入蒸餾水中數小時,取出觀察結果或用光密度計在500nm波長下掃描定量。需要時可平推至空白卡片紙上,37℃孵箱過夜,乾片保存。或用無PMS、INT底物顯色液,37℃水箱孵育20min。
(6)再置60℃乾燥箱中20min,在紫外燈(365nm)下觀察熒光。有條件者用熒光光密度計掃描定量,激發波長360nm,發射波長460nm。
4.結果觀察
瓊脂糖凝膠電泳法的結果觀察如圖9-14所示。
5.注意事項
廣泛存在於各種組織的腺苷酸激酶(AK)催化ADP產生ATP,干擾同工酶結果的判斷。加入AMP可抑制此反應,但過量AMP也抑制CK。NaF抑制AK,不抑制CK,與AMP合用可抑制各種AK同工酶的97%。NaF與CK激活劑Mg2+可逐漸形成MgF2沉澱,所以,NaF與Mg2+分開配製,臨時混合,不影響各自的作用。電泳需較高pH,酶反應需較低pH,本法中用低離子強度,pH低於8.6的電泳緩沖液;高離子強度,pH低於6.7的基質緩沖液。當含瓊脂糖的基質顯色劑覆蓋於電泳後的凝膠板,上下凝膠中的成分相互擴散後的pH,恰為酶作用的最適pH。Bis-Tris全名為Bis(2-羥乙基)亞氨基-Tris(羥甲基)甲烷,25℃時pKa=6.46,是CK同工酶。測定優選的緩沖劑,200mmol/L時,CK活力最大。如無Bis-Tris;亦可用咪唑加EDTA作基質緩沖液。EDTA作Ca2+的絡合劑,因Ca2+抑制CK活力。血清CK活力隨溫度升高而增加,直至45℃;更高溫度迅速下降,56℃時很快失活。瓊脂糖電泳法測CK同工酶,絕不能象作LDH同工酶用溫度較高的瓊脂糖基質顯色液,否則CK活力喪失。而非脫氫酶反應(Nothingdehydogenase,NDH)顯著。NDH是相當於白蛋白及β球蛋白區帶處的紫紅色區帶,與蛋白質的巰基有關,標本用量大,pH高時尤其明顯,僅四唑鹽及PMS就可與標本產生,用測NADPH熒光法可避免。本法中標本用量少,顯色時pH較低,NDH反應不明顯。CK是巰基酶,絕對需要巰基試劑活化。但巰基試劑可還原四唑鹽,N-乙醯半胱氨酸及谷胱甘肽還原四唑鹽能力弱,可使背景清晰。PVP是隋性聚合體,作為酶擴散的障礙物加入,可改善區帶分離效果。CK不穩定,對光、熱及高pH敏感,最好將及時分出的血清充C02後塞緊管口,置冰室或-30℃保存,至少可穩定半個月,及時測定更好。不主張加巰基活化劑保存。影響CK同工酶電泳與顯色的因素很多,必須同時作控制物。

附件:新建 Microsoft Word 文檔.doc
該回答在5月25日 09:58由回答者修改過

參考文獻:儀器信息網,http://www.xbmu.e.cn/k

㈢ biowest agarose 與agarose有什麼區別

區別是:
biowest agarose 指的是西班牙瓊脂糖。
agarose指的是瓊脂糖。

關鍵詞語解釋:
agarose 英['ɑ:gərəʊs] 美['ɑ:gəˌroʊs]
n. 瓊脂糖;
[例句]
1、These liabilities prompted development of agarose and agarose-acrylamide gels.
這些不穩定性促使瓊脂糖和瓊脂糖&丙烯醯胺凝膠的發展。
2、Methods ALP isoenzyme in the serum of50 normal healthy persons and 134 cases oftumors were analyzed by agarose electrophoresis.
方法用瓊脂糖電泳法對50例體檢健康者和134例惡性腫瘤患者血清中的ALP同工酶進行分析。
3、The thymocytes apoptosis was observed by agarose gelelectrophoresis and cellmorphology.

用瓊脂糖凝膠電泳和細胞形態學觀察細胞凋亡。
4、Methods YAP element was detected by PCR amplification and agarose gelelectrophoresis.

方法利用PCR法對此位點進行擴增,經過瓊脂糖凝膠電泳檢測結果。
5、The results of agarose gel electrophoresis and DNA sequence analysis indicatedthat the PCR method had high specificity and sensitivity.

結果經瓊脂糖凝膠電泳和DNA序列測定證實,建立的PCR檢測方法具有極高的靈敏度和較好的特異性。

㈣ 1.8%瓊脂 要多少克

哎,我想提問的朋友是要配瓊脂固體培養基吧。
1.8%指的是質量體積比(W/L),也就是說每100ml溶液需要加入1.8g的瓊脂粉(agar)。

如果你真是要跑電泳,那注意應該是瓊脂糖(agarose),實在不行確認一下英文名,不能搞混了。

㈤ 凝膠電泳所需瓊脂糖粉 國產貨推薦

上海生工的不錯,不過我的實驗室也是進口的
你用二次的凝膠不清晰估計是被氧化的結果,所以這點錢咱們還是不要省了,把電泳用在刀刃上吧

㈥ 請問大家invitrogen瓊脂糖和西班牙瓊脂糖那個用的好

我們實驗室一般都是用的invitrogen瓊脂糖,我在華越洋生物網站上訂貨的時候看到他們也有賣西班牙瓊脂糖,但是西班牙的我沒用過,你可以打電話問問他們,他們應該比較了解呢。。。

㈦ 西班牙原裝瓊脂糖如何辨別真偽從網上買了瓶西班牙原裝瓊脂糖,但是感覺效果沒有以前的好,我是不是買到

正貨灰色圓圈部位如果放大顯示是由深藍色的點和白色的點組成,而且深色的點是不均勻的,整體圖形的網格形成斜線排列。
假貨相同部位放大後形成的圖案大多都是規則的網格狀,或者是均勻的灰色,少數高仿假貨也會有不規則的深色點,但是整體圖形的網格形成都是水平和垂直線。
在網上買瓊脂糖可以去索萊寶,千萬不要因為價格便宜而為以後引來大麻煩。

㈧ 國產和西班牙瓊脂糖跑膠的區別

西班牙的質量和療效更好
西班牙瓊脂糖是由瓊脂中分離出瓊脂果膠(agaropectin)的成分得來,溶解性是瓊脂糖粉不溶於冷水,易溶於沸水,緩溶於熱水。檢測凝膠強度為1.0%瓊脂糖溶液在20攝氏度凝固後,能夠表面不破承受的最大壓強是1200g/cm2在生物學實驗中,瓊脂糖用於DNA、脂蛋白和免疫電泳用;生化研究免疫擴散等的承載物。當實驗中遇到瓊脂糖不凝固時,常規的檢測方法時pH值,濃度,溫度,充分混勻等情況。

㈨ 瓊脂糖凝膠怎麼配製

把瓊脂糖,即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂,溶於熱水,倒入玻璃杯中,冷卻製成的凝膠。融化後在37°C下可維持液態數小時,30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。

製成的小顆粒用於凝膠過濾,適於用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾,若使用5%以下濃度的凝膠,也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點,有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內沉降反應的支持物。

(9)西班牙瓊脂糖多少g每瓶擴展閱讀:

瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾後熔點降低的低熔點瓊脂糖,瓊脂糖的熔點在62〜65°C之間,多用於對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠由於孔徑大常用於大分子蛋白質、DNA的分離。

瓊脂由瓊脂糖和瓊脂果膠兩部分組成:

作為膠凝劑的瓊脂糖是不含硫酸酯的非離子型多糖,是形成凝膠的組分,其大分子鏈鏈節著1,3苷鍵交替相連的β-D-半乳糖殘基和3,6-內醚-L-半乳糖殘基 。而瓊脂果膠是非凝膠部分,是帶有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的復雜多糖,也是商業提取中力圖去掉的部分。

商品瓊脂一般帶有2%~7%的硫酸酯,0%~3%的丙酮酸醛及1%~3%的甲乙基。在工業上的瓊脂 色澤由白到微黃,具有膠質感,無氣味或有輕微的特徵性氣味,瓊脂不溶於冷水,易溶於沸水。

瓊脂系選用優質天然石花菜、江蘺菜、紫菜等海藻為原料,採用科學方法精煉提純的天然高分子多糖物質。

瓊脂為親水性膠體,分有條狀和粉末狀,不溶於冷水,易溶於熱水。瓊脂在工業上具有獨特的重要性,瓊脂的濃度即使低至1%仍能形成相當穩定的凝膠,是食品工業、化學工業、醫學科研所必需之原料。

熱點內容
西班牙8號球員有哪些 發布:2023-08-31 22:08:22 瀏覽:1615
怎麼買日本衣服 發布:2023-08-31 22:08:20 瀏覽:987
紐西蘭有哪些人文景點 發布:2023-08-31 22:06:06 瀏覽:1684
皇馬西班牙人哪個台播 發布:2023-08-31 22:05:05 瀏覽:1537
新加坡船廠焊工工資待遇多少一個月 發布:2023-08-31 22:01:05 瀏覽:1649
緬甸紅糖多少錢一斤真實 發布:2023-08-31 21:57:45 瀏覽:1295
緬甸200萬可以換多少人民幣 發布:2023-08-31 21:57:39 瀏覽:1250
紐西蘭跟中國的時差是多少 發布:2023-08-31 21:53:49 瀏覽:2567
中國哪個地方同時與寮國緬甸接壤 發布:2023-08-31 21:52:06 瀏覽:1266
土耳其簽證選哪個國家 發布:2023-08-31 21:37:38 瀏覽:942